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星空app:盐酸巴多昔芬_LY2784544_Gandotinib_生物活性和实验方法

发布时间:2018-10-20 21:22:59 编辑作者:活性小子

盐酸巴多昔芬图片

图片:盐酸巴多昔芬结构式

盐酸巴多昔芬(LY2784544)是一种有效的 JAK2 抑制剂,IC50 为 3 nM。LY2784544 也抑制FLT3,FLT4,FGFR2,TYK2 和 TRKB,IC50 分别为 4,25,32,44 和 95 nM。

一、盐酸巴多昔芬的生物活性:
1)体外活性
LY2784544,一种有效的,选择性和ATP竞争性的janus激酶2(JAK2)酪氨酸激酶抑制剂。 LY2784544有效抑制Ba / F3细胞中JAK2V617F驱动的信号传导和细胞增殖(IC50分别为20和55nM)。 相比之下,LY2784544在抑制白细胞介素-3刺激的野生型JAK2介导的信号传导和细胞增殖方面的效力要小得多(IC50分别为1183和1309nM)。 LY2784544有效抑制JAK2V617F信号传导(IC50 = 20 nM),但显着地显示出对IL-3激活的野生型JAK2信号传导的非常小的活性,IC50为1183 nM。 LY2784544抑制表达JAK2V617F的细胞的增殖(IC50 = 55nM),并且作为IL-3刺激的表达野生型JAK2的Ba / F3细胞增殖的抑制剂(IC50 = 1309nM)显着降低效力。 LY2784544在基于细胞的TF-1 JAK2测定中有效(IC50 = 45 nM),并且在NK-92 JAK3 / JAK1异二聚体测定(942 nM)中具有所需的阈值选择性[1]。在增殖实验中, LY2784544对JAK2 V617F驱动的细胞具有抗增殖效应(IC50:68 nM);对野生型JAK2驱动细胞的IC50为1356 nM;对JAK3驱动细胞的IC50为940 nM。LY2784544对IL-3激活的野生型JAK2也有抑制作用(IC50:2.26 μM)。

2)体内活性
LY2784544有效抑制Ba / F3-JAK2V617F-GFP(绿色荧光蛋白)腹水肿瘤细胞(TED50 = 12.7 mg / kg)中的STAT5磷酸化,并显着降低(P <0.05)JAK2V617F中Ba / F3-JAK2V617F-GFP肿瘤负荷 诱导MPN模型(TED50 = 13.7 mg / kg,每日两次)[1]。作用于在患有重症联合免疫缺陷小鼠的脾脏中,LY2784544(p.o.)不影响CD71/Ter119 阳性红系祖细胞。LY2784544对Ba/F3-JAK2 V617F-GFP移植瘤中的STAT5磷酸化有显著抑制效果(TED50:12.7 mg/kg)。在JAK2 V617F诱导的MPN模型中,LY2784544(p.o.)还减少Ba/F3-JAK2 V617F-GFP肿瘤负担(TED50:13.7 mg/kg)。

二、盐酸巴多昔芬的实验方法:
1)细胞实验
将LY2784544溶解于DMSO中并储存,然后在使用前用适当的培养基稀释[1]。 将表达JAK2V617F的Ba / F3细胞置于含RPMI-1640的载体(DMSO)或LY2784544(浓度范围0.001-20μM)(1×104细胞/ 96孔)中。 除了添加IL-3(2ng / mL)之外,类似地处理表达野生型JAK2的Ba / F3细胞。 孵育72小时后,通过加入Cell Titer 96 Aqueous One Solution Reagent(20μL/孔)评估细胞增殖。 使用GraphPad Prism 4软件[1]计算抑制细胞增殖的IC 50。

2)动物实验
小鼠-通过测量小鼠腹水肿瘤模型中STAT5磷酸化的抑制来评估JAK2V617F信号传导的剂量和时间依赖性体内抑制。将Ba / F3-JAK2V617F-GFP细胞(1×107)植入严重联合免疫缺陷小鼠(SCID小鼠)的腹腔内,并使其发展成腹水肿瘤7天。对于剂量反应研究(6只动物/组),LY2784544通过口服强饲法(2.5,5,10,20,40或80 mg / kg)给药一次,然后30分钟后,收集,固定,收集腹水肿瘤细胞,用Mouse-anti-pSTAT5(pY694)Alexa Fluor 647(1:10稀释)孵育2小时,并通过流式细胞术分析。时间过程研究类似地进行,除了动物用20,40或80mg / kg的LY2784544处理,并且在给药后以0.25-6小时的预定间隔收集腹水肿瘤细胞。通过单因素方差分析和Dunnett检验(α= 0.05)分析数据。使用四参数逻辑曲线拟合程序分析剂量响应数据。

综上所述:盐酸巴多昔芬LY2784544(Gandotinib)是一种有效的JAK2抑制剂(IC50:3 nM),对JAK2V617F有效(Ki:0.245 nM)。 选择性比JAK1和JAK3高8倍和20倍。它的靶点活性为FLT3,4nM;JAK1,19.8nM;JAK2,3nM;JAK2 (V617F),0.245nM(Ki)。

参考文献:
[1]. Ma L, et al. Discovery and characterization of LY2784544, a small-molecule tyrosine kinase inhibitor of JAK2V617F. Blood Cancer J. 2013, 3, e109.

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