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星空app:巴瑞克替尼的生物活性和实验方法

发布时间:2018-10-20 21:01:59 编辑作者:活性小子

巴瑞克替尼图片

图片:巴瑞克替尼结构式

巴瑞克替尼是Janus激酶1和2(JAK1 / 2)的口服生物可利用抑制剂,具有潜在的抗炎,免疫调节和抗肿瘤活性。

一、巴瑞克替尼的生物活性:
1)体外活性
在分离的未成熟型T 细胞中(IC50=20 nM),巴瑞克替尼抑制IL-23刺激的STAT3的磷酸化。在外周血单核细胞中,巴瑞克替尼抑制IL-6刺激底物STAT3的磷酸化(IC50=44 nM)以及随后趋化因子MCP-1(IC50=40 nM)的产生。

2)体内活性
在佐剂性关节炎大鼠模型中巴瑞克替尼(10mg / kg口服)可抑制JAK1 / 2信号传导,同时抑制免疫浸润。在CIA和CAIA模型中,巴瑞克替尼(10 mg / kg)改善软骨损伤和炎症,抑制迟发型超敏反应。

二、巴瑞克替尼的实验方法:
1)细胞实验
将巴瑞克替尼(INCB 028050)溶解于储备溶液中,然后在使用前用适当的培养基稀释[1]。 通过白细胞分离术分离人PBMC,然后进行Ficoll-Hypaque离心。 为了测定IL-6诱导的MCP-1产生,在存在或不存在各种浓度的INCB028050(1 nM,10 nM,100 nM)的情况下,将PBMC以每孔3.3×10 5个细胞接种于RPMI 1640 + 10%FCS中。 ,1μM和10μM)。 在室温下与星空app预孵育10分钟后,通过向每个孔中加入10ng / mL人重组IL-6来刺激细胞。 将细胞在37℃,5%CO 2下孵育48小时。 收获上清液并通过ELISA分析人MCP-1的水平。 INCB028050抑制IL-6诱导的MCP-1分泌的能力被报道为50%抑制所需的浓度(IC50)。 使用Cell-Titer Glo [1]在3天内进行Ba / F3-TEL-JAK3细胞的增殖。

2)动物实验
大鼠[1]
雌性大鼠(每组性别n = 6)给予10mg / kg 巴瑞克替尼剂量,并以10mL / kg口服强饲法给予。前3只大鼠在0(给药前),2小时,8小时和24小时放血,并且在给药后1,4和12小时对第二只三只大鼠放血。 EDTA用作抗凝血剂,并将样品离心以获得血浆。已经开发了用于定量INCB028050的分析方法并用于分析来自毒理学研究的样品。该方法将蛋白质沉淀萃取与10%甲醇在乙星空app中进行结合并进行LC / MS / MS分析。该方法使用0.1mL研究样品证明线性测定范围为1-5000nM。使用Analyst 1.3.1处理数据。使用加权线性回归(1 / x2)从峰面积比对浓度确定标准曲线。
小鼠[2]
AA的C3H / HeJ移植受体小鼠模型用于这些实验。简言之,将来自自发性脱发的C3H / HeJ小鼠的脱发性皮肤移植到没有疾病的8-10周龄C3H / HeJ小鼠上。在移植时,植入施用约0.7mg /天的巴瑞克替尼或安慰剂的渗透泵。渗透泵每月更换一次。进行间隔删失数据的时间 - 事件生存分析。 R中的生存和间隔包用于执行对数秩检验。在(n = 10)巴瑞克替尼治疗的小鼠和(n = 10)安慰剂治疗的小鼠中,存活分布相等的假设在5%的水平被拒绝,使用Sun的评分进行精确的对数秩双样本检验p值为0.0035。

3)激酶实验
使用具有重组表位标记的激酶结构域的均相时间分辨荧光测定法(JAK1,837-1142; JAK2,828-1132; JAK3,718-1124; Tyk2,873-1187)或全长酶(cMET)进行酶测定。 和Chk2)和肽底物。 每种酶反应在有或没有测试星空app(11点稀释),JAK,cMET或Chk2酶,500nM(Chk2为100nM)肽,ATP(对每种激酶特异性的Km或1mM)下进行,和 在测定缓冲液中加入2.0%DMSO。 计算的IC 50值是抑制50%荧光信号所需的星空app浓度。 使用200nM的标准条件在Cerep进行另外的激酶测定。 测试的酶包括:Abl,Akt1,AurA,AurB,CDC2,CDK2,CDK4,CHK2,c-kit,EGFR,EphB4,ERK1,ERK2,FLT-1,HER2,IGF1R,IKKα,IKKβ,JNK1,Lck,MEK1, p38α,p70S6K,PKA,PKCα,Src和ZAP70 [1]。

综上所述:巴瑞克替尼是Janus激酶1和2(JAK1 / 2)的口服生物可利用抑制剂,具有潜在的抗炎,免疫调节和抗肿瘤活性。它的靶点活性为JAK1,5.9nM;JAK2,5.7nM;JAK3,>400nM;Tyk2,53nM;Chk2,>1μM。

参考文献:
[1]. Fridman JS, et al. Selective inhibition of JAK1 and JAK2 is efficacious in rodent models of arthritis: preclinical characterization of INCB028050. J Immunol. 2010 May 1;184(9):5298-307.
[2]. Jabbari A, et al. Reversal of Alopecia Areata Following Treatment With the JAK1/2 Inhibitor Baricitinib. EBioMedicine. 2015 Feb 26;2(4):351-5.
[3]. Khan IM, et al. Intermuscular and perimuscular fat expansion in obesity correlates with skeletal muscle T cell and macrophage infiltration and insulin resistance. Int J Obes (Lond). 2015 Nov;39(11):1607-18.

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